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| 目的探讨尿液细胞（UC）来源重编程诱导性多能干细胞（iPSCs）分化的神经干细胞（NSCs）联合3D打印支架移植修复大鼠急性脊髓损伤（ASCI）的作用。方法将UC诱导分化为iPSCs，通过ALP活性检测、HE染色观察畸胎瘤形成及免疫荧光检测全能性蛋白OCT4、NANOG、TRA-1-81、TRA-1-60的表达验证iPSCs全能性。将iPSCs向NSCs分化，免疫荧光染色检测巢蛋白（Nestin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和β-微管蛋白（β-tubulinⅢ）的表达。制备3D打印支架。选择成年雄性SD大鼠42只，按随机数字表法分为模型组、支架模型组、iPSCs-NSCs组，每组14只。采用改良Allens法建立大鼠ASCI模型，1周后模型组于损伤处滴入DMEM培养液0.2ml，支架模型组于损伤处植入载DMEM培养液的2~3mm支架，iPSCs-NSCs组于损伤处植入载iPSCs-NSCs的2~3mm支架。1、2、4、6、8周后采用开放领域运动测试（BBB）评分评价3组大鼠关节协调功能。8周后采用Tarlov和Rivlin评分评价3组大鼠后肢运动功能，生物信号采集处理系统观察大鼠运动、感觉诱发电位潜伏期和振幅；取伤段脊髓组织做病理检查，观察脊髓组织病理改变。结果成功提取UC并诱导分化为iPSCs，ALP染色呈阳性，HE染色显示畸胎瘤形成；免疫荧光染色显示全能性蛋白OCT4、NANOG、TRA-1-81、TRA-1-60表达。成功诱导iPSCs分化为NSCs，GFAP和β-tubulinⅢ表达良好表明细胞分化能力良好。成功打印3D支架，电镜显示内部呈三维立体疏松多孔结构。干预2、4、6、8周后，iPSCs-NSCs组大鼠BBB评分均高于模型组和支架模型组（均P＜0.05）；干预8周后，iPSCs-NSCs组大鼠Tarlov和Rivlin评分均高于模型组和支架模型组，运动和感觉诱发电位潜伏期均短于模型组和支架模型组，运动和感觉诱发电位振幅均大于模型组和支架模型组（均P＜0.05）。HE染色显示模型组大鼠脊髓组织受损，组织水肿明显，细胞稀疏；支架模型组大鼠脊髓组织受损程度轻于模型组，组织水肿，细胞稀疏；iPSCs-NSCs组大鼠脊髓组织生长良好，细胞致密，空泡减小，组织水肿消失。结论UC来源iPSCs-NSCs联合3D打印支架移植可促进ASCI大鼠运动和感觉功能的恢复及受损节段脊神经纤维生长。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2021.43.3.2020-2681 |
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| 基金项目:浙江省医药卫生科技计划项目（2018248755）；萧山区科技重大专项项目（2017209） |
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