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| 目的探讨亚甲基四氢叶酸脱氢酶2（MTHFD2）对人肝细胞癌（HCC）细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的HepG2和SMMC-7721细胞随机分为siMTHFD2#1组、siMTHFD2#2组和siCtrl组3组，分别转染MTHFD2-siRNA#1、MTHFD2-siRNA#2及Ctrl-siRNA。通过siRNA技术构建MTHFD2和p53正向凋亡调节因子（Puma）敲低的HCC细胞模型，分为siMTHFD2+siPuma组（共转染MTHFD2-siRNA和Puma-siRNA）、siMTHFD2组（转染MTHFD2-siRNA）、siPuma组（转染Puma-siRNA）、siNC组（转染阴性对照剂Ctrl-siRNA）。采用流式细胞术和Westernblot法检测敲低MTHFD2表达后细胞凋亡率和凋亡相关信号通路的蛋白表达水平变化情况。通过CCK-8实验和流式细胞术进一步分析MTHFD2和Puma共敲减后细胞增殖能力和凋亡率的变化情况。结果HepG2和SMMC-7721细胞中siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组的MTHFD2表达水平均明显低于siCtrl组（均P＜0.01）。HepG2和SMMC-7721细胞中siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组的细胞凋亡率均明显高于siCtrl组（均P＜0.01）。与siCtrl组比较，siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组HepG2和SMMC-7721细胞的CleavedCaspase3/ProCaspase3、CleavedCaspase7/ProCaspase7比值均明显升高，siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组SMMC-7721细胞的CleavedPARP/ProPARP比值明显升高（均P＜0.05）。与siCtrl组比较，SMMC-7721细胞siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组中Puma表达水平均明显升高（均P＜0.01），3组Bim、Bid、Bad、Bik、Bak、Bax表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。在96h的时间点，siMTHFD2组OD值低于siNC组，而siMTHFD2+siPuma组的OD值则明显高于siMTHFD2组（均P＜0.01）。siMTHFD2组凋亡率高于siNC组，siMTHFD2+siPuma组则明显低于siMTHFD2组（均P＜0.01）。结论抑制MTHFD2的表达能够诱导人HCC细胞发生凋亡，是通过上调Puma表达水平来实现的。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2021.43.11.2021-447 |
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| 基金项目:国家自然科学基金项目（81502106）；浙江省科技厅公益类项目（LGF21H160020）；舟山市公益类科技项目（2019C31076） |
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