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| 目的探讨骨保护素（OPG）对间歇性循环牵张力（ICMT）加力诱导下退变的关节软骨细胞保护作用的机制。方法获取大鼠膝关节软骨细胞，传代至P2代进行实验，对细胞用FX-5000TM细胞体外力学刺激装置进行力学刺激，建立关节软骨细胞体外退变模型。P2代软骨细胞随机分为对照组、ICMT3d组（在与对照组相同培养条件下对细胞进行8％压强的ICMT，0.5Hz，10h/d，加力3d）、OPG组（在细胞培养液中加入一定浓度的OPG培养细胞）、ICMT3d+OPG组（对用含有OPG的细胞培养液培养的细胞进行加力3d）。培养3d后收集各组细胞，应用倒置相差光学显微镜观察关节软骨细胞的表型变化，甲苯胺蓝染色法观察细胞表面形态，四噻唑蓝法检测不同浓度OPG和不同ICMT作用时间下关节软骨细胞存活率的变化。RT-PCR法检测各组关节软骨细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SRY相关高迁移率族盒蛋白9（SOX-9）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）mRNA表达水平，Westernblot法检测各组关节软骨细胞中NF-资B信号通路相关蛋白MMP-13、p65、磷酸化p65（p-p65）蛋白表达水平。结果与对照组比较，ICMT3d组细胞发生梭形改变，细胞外基质减少；ICMT3d+20ngOPG组细胞形态变化不明显，细胞外基质的丢失得到改善。ICMT1d组、ICMT2d组、ICMT3d组、5ngOPG组、10ngOPG组和20ngOPG组与对照组关节软骨细胞存活率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与对照组比较，ICMT1d组、ICMT3d组细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SOX-9mRNA表达水平均下降，ICMT3d组细胞中MMP-13mRNA表达水平升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较，ICMT3d+10ngOPG组细胞中二型胶原、SOX-9mRNA表达水平均升高，ICMT3d+20ngOPG组细胞中二型胶原、蛋白聚糖、SOX-9mRNA表达水平均升高，ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组细胞中MMP-13mRNA表达水平均下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较，ICMT3d+5ngOPG组、ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组MMP-13蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。与ICMT3d组比较，ICMT3d+10ngOPG组、ICMT3d+20ngOPG组中p-p65蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。结论OPG通过影响NF-资B信号通路可以抑制大鼠膝关节软骨细胞的退变，从而起到保护关节软骨的作用。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2022.44.9.2021-464 |
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| 基金项目:国家自然科学基金项目（81272048）；宁波市科技计划项目（2017A610182） |
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