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| 目的探讨微小RNA-26a-5p（miR-26a-5p）对腹水来源的高转移人肝癌细胞系SK-HEP-1生物学行为的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测比较人正常肝细胞LO2及不同人肝癌细胞系（HepG2、BEL-7402、SMMC-7721、MHCC97H和SK-HEP-1）中miR-26a-5p和IL-6mRNA的表达水平。选择低表达水平的SK-HEP-1细胞转染miR-26a-5p模拟物，采用qRT-PCR法和ELISA法检测转染后细胞中miR-26a-5p、IL-6mRNA的表达水平和IL-6的分泌情况。划痕和Transwell实验检测miR-26a-5p对SK-HEP-1细胞转移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因检测miR-26a-5p与IL-63'-非编码区（UTR）的靶向结合关系。Westernblot法检测miR-26a-5p对SK-HEP-1细胞中信号转导和转录激活因子3（STAT3）蛋白磷酸化和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达变化。采用qRT-PCR法检测miR-26a-5p对EMT相关基因表达水平的影响。结果与LO2相比，人肝癌细胞中miR-26a-5p相对表达量明显下调，IL-6mRNA相对表达量明显上调，其中SK-HEP-1中相对表达量差异最为显著。miR-26a-5p模拟物转染SK-HEP-1细胞后，miR-26a-5p相对表达量显著增高，IL-6mRNA和蛋白相对表达量显著下调。双荧光素酶报告基因实验证实miR-26a-5p与IL-63'-UTR存在序列特异性靶向结合关系。与空白对照组和模拟物对照组相比，miR-26a-5p模拟物明显抑制SK-HEP-1细胞迁移和侵袭的能力，同时显著降低IL-6下游信号STAT3蛋白的磷酸化水平，升高E-钙黏蛋白相对表达量和降低波形蛋白相对表达量。与模拟物对照组相比，miR-26a-5p模拟物显著改变EMT相关基因表达。结论miR-26a-5p通过靶向抑制IL-6mRNA，下调STAT3磷酸化，调控肝癌EMT标志物的基因和蛋白水平的表达，从而逆转肝癌细胞SK-HEP-1迁移和侵袭。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2023.45.9.2022-1816 |
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| 基金项目:江苏省中医药科技发展计划项目（YB2020019） |
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