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| 目的建立针对登革病毒（DENV）、黄热病毒（YFV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）、寨卡病毒（ZIKV）的四重逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）技术，用于同时快速检测上述4种病毒。方法通过正交设计建立检测4种蚊媒病毒（DENV、YFV、CHIKV、ZIKV）的四重RT-RPA反应体系。通过质粒标准品、体外转录RNA和临床血清验证单重RT-RPA和四重RT-RPA的检测灵敏度、特异度、重复性和临床应用符合率。结果单重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV、ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、＜1×102Copies/ml，对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV体外合成RNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml，四重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml，对体外合成RNA的检出限分别为5×102、5×102、5×102、5×102Copies/ml。本研究建立的单重及四重RT-RPA反应体系与其他常见病毒不存在交叉反应，RT-RPA法测定的阈值时间值（TT）的变异系数为1.76%~5.96%。四重RT-RPA法对不同病毒体外转录RNA检出率不同，DENV、YFV和CHIKV为100.00%，ZIKV为83.33%。单重RT-RPA、四重RT-RPA、RT-PCR对DENV临床样本的检出率无统计学差异（P＞0.05）。结论本研究建立的针对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV的单重RT-RPA和四重RT-RPA检测方法特异度好、灵敏度高、重复性好，对蚊媒传染病的早期诊断及鉴别诊断具有重要作用，同时也为其他新发再发传染病的快速诊断方法建立提供研究方向。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2022.44.10.2022-818 |
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| 基金项目:国家自然科学基金重点项目（81930111）；浙江省医药卫生科技计划项目（2022PY016）；杭州市医药卫生科技项目（Z2021005） |
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