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| 目的探讨木犀草素介导蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）/真核翻译启动因子2α（eIF2α）/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）信号通路改善新生大鼠坏死性小肠结肠炎（NEC）的作用及相关机制。方法取新生SD大鼠30只，其中24只采用缺氧冷刺激法建立NEC大鼠模型，按随机数字表法分为木犀草素17.5mg/kg组、木犀草素35mg/kg组、木犀草素70mg/kg组、模型组，另6只大鼠设为正常组（仅予0.1mL0.9%氯化钠溶液干预处理），1次/d，连续灌胃给药4d。取大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞采用脂多糖刺激法建立NEC细胞模型并分为木犀草素5μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组、模型组，取未经脂多糖处理的IEC-6细胞设为正常组（仅予0.9%氯化钠溶液干预处理）；另取建模后的IEC-6细胞分为GSK26064140.5μmol/L组、GSK26064141.0μmol/L组、GSK26064142.0μmol/L组、GSK26064144.0μmol/L组、模型组（仅予等体积0.9%氯化钠溶液干预处理），采用噻唑蓝法筛选细胞存活率最高的药物浓度（木犀草素20μmol/L，GSK26064144.0μmol/L）作为后续实验浓度，增设木犀草素20μmol/L+GSK26064144.0μmol/L组。采用HE染色观察大鼠肠道组织病理学变化，采用原位末端转移酶标记法、ELISA法、Westernblot法分别检测木犀草素对大鼠肠道组织凋亡率，大鼠肠道组织、血清及IEC-6细胞中TNF-α、IL-6水平，以及大鼠肠道组织及IEC-6细胞中PERK/eIF2α/CHOP信号通路相关因子表达水平的影响。结果与模型组比较，木犀草素35mg/kg组、木犀草素70mg/kg组大鼠肠道组织损伤均有不同程度的改善，且细胞凋亡率均明显较低（均P＜0.05）。与模型组比较，木犀草素35mg/kg组、木犀草素70mg/kg组大鼠肠道组织中TNF-α、IL-6水平明显较低（均P＜0.05），木犀草素17.5mg/kg组、木犀草素35mg/kg组、木犀草素70mg/kg组大鼠肠道组织中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平以及血清中TNF-α、IL-6水平均明显较低（均P＜0.05），木犀草素20μmol/L组IEC细胞中TNF-α、IL-6以及p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平均明显较低（均P＜0.05）；与木犀草素20μmol/L组比较，木犀草素20μmol/L+GSK26064144.0μmol/L组IEC-6细胞中p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平均明显较低（均P＜0.05）。结论木犀草素可有效改善新生大鼠NEC，其作用机制可能与下调TNF-α、IL-6以及p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、CHOP表达水平进而抑制炎症反应有关。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2023.42.21.2023-1041 |
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| 基金项目:杭州市医药卫生科技计划项目（20220919Y051） |
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