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| 目的探讨LED光源照射对人视网膜色素上皮（RPE）细胞自噬和凋亡的影响，以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002在光照下对RPE细胞自噬和凋亡的影响。方法体外培养人ARPE-19细胞，随机分为6h对照组、6h模型组、6hLY294002组，12h对照组、12h模型组、12hLY294002组，24h对照组、24h模型组、24hLY294002组，分别给于设定时间的LED冷光照射或加入LY294002后的光照。采用噻唑蓝法检测各组细胞存活率；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；透射电子显微镜观察各组细胞超微结构；构建稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3（LC3）的RPE细胞株，激光共聚焦合倒置荧光显微镜分析细胞自噬流变化；Westernblot法检测苄氯素1（Beclin1）、LC3和p62自噬相关蛋白表达水平。结果与对照组比较，6、12、24h模型组细胞存活率均下降（均P＜0.05），12、24hLY294002组细胞存活率均下降（均P＜0.01）；与模型组比较，12、24hLY294002组细胞存活率均升高（均P＜0.05）。与对照组比较，6、12、24h模型组和LY294002组细胞凋亡率均升高（均P＜0.05）；与模型组比较，6、12hLY294002组细胞凋亡率均下降（均P＜0.05）。模型组RPE细胞在光照24h后，胞内可见较多的自噬泡，LY294002干预后也可见聚集性分布的自噬囊泡。观察自噬流发现，对照组少见红色亮点，模型组红色亮点荧光随光照时间延长数量逐渐增多，Merge图中黄色亮点数量增多明显，LY294002干预后，红色亮点与黄色亮点呈增多趋势。与对照组比较，6、12、24h模型组和LY294002组细胞中Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平均升高，p62蛋白表达水平均下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；与模型组比较，6、12、24hLY294002组细胞中Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均升高，12、24hLY294002组细胞中p62蛋白表达水平均下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论LED光源照射可刺激ARPE-19细胞发生自噬，增加细胞凋亡率；PI3K抑制剂LY294002能上调细胞的自噬活性，减缓凋亡。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.2.2023-1480 |
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| 基金项目:国家自然科学基金项目（82060885） |
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