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| 目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）Hotair在慢性肾脏病（CKD）小鼠模型肾脏纤维化中的作用及其机制。方法采用随机数字表法将36只小鼠分为对照组、CKD组、CKD+短发夹RNA-对照（sh-Ctrl）组、CKD+短发夹RNA-Hotair（sh-Hotair）组，每组9只。对照组喂食正常饲料，其余3组均予0.2%腺嘌呤饲料喂养造模。造模6周后，CKD+sh-Ctrl组和CKD+sh-Hotair组分别予尾静脉注射100μL（1011基因拷贝）包装了对照shRNA和Hotair-shRNA的腺相关病毒，对照组和CKD组予尾静脉注射100μL0.9%氯化钠注射液。观察8周后处死，检测血清肌酐、尿素氮水平，取肾组织行HE染色和Masson染色观察肾脏纤维化情况。采用qRT-PCR法检测肾皮质Hotair、多梳抑制复合体2（PRC2）复合物[Zeste增强子同源物2（EZH2）、Zeste12同源物抑制因子（SUZ12）、胚胎外胚层发育蛋白（EED）]和赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）mRNA表达水平，Westernblot法检测肾皮质纤维化相关蛋白胶原蛋白1A1（COL1A1）、胶原蛋白4A1（COL4A1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cad-herin）的表达水平，并检测PRC2复合物和LSD1的蛋白表达水平。结果与对照组比较，CKD组小鼠体重下降、肾功能恶化，出现肾脏纤维化，肾皮质Hotair表达升高；与CKD+sh-Ctrl组比较，CKD+sh-Hotair组小鼠血清肌酐、尿素氮水平均降低（均P＜0.01），病理检查显示肾脏纤维化程度减轻，肾皮质Hotair表达下降（P＜0.01）。与对照组比较，CKD组小鼠COL1A1、COL4A1和α-SMA蛋白表达水平均增加，E-cadherin表达水平减少，PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1mRNA和蛋白表达水平均升高（均P＜0.01）。与CKD+sh-Ctrl组比较，CKD+sh-Hotair组小鼠COL1A1、COL4A1和α-SMA蛋白表达水平均降低，E-cadherin蛋白表达水平恢复，PRC2复合物中EZH2、EED和LSD1mRNA和蛋白表达水平均下降（均P＜0.01）。结论lncRNAHotair在CKD小鼠模型中表达升高，敲低Hotair可缓解肾脏纤维化，可能与Hotair作为PRC2和LSD1的分子支架介导的表观遗传修饰相关。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2023.45.22.2023-1545 |
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| 基金项目:浙江省自然科学基金项目（LQ19H050003） |
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