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| 目的研究磷脂酰肌醇三羟激酶（PI3K）、组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）和细胞松弛素B对脐带血造血干细胞体外培养促红系脱核的作用，以期建立高效脱核体系。方法采用磁分选富集脐带血CD34+细胞。在培养第0、4天添加干细胞因子（SCF）、IL-3、促红细胞生成素（EPO），培养第7天添加SCF、EPO，培养第11、15、18天仅添加EPO。分别于第7、11、15和18天添加PI3K（0、25、50、100ng/mL）、HDAC2（0、60、150、300ng/mL）、细胞松弛素B（0、25、50、75ng/μL）3种脱核剂。采用正交设计实验分析3种脱核剂的浓度和添加时间4因素4水平对促红系脱核效果的影响，获得最佳脱核条件并作为优选组，以不加脱核剂培养作为对照组进行验证。细胞培养至第21天时，用流式细胞仪分别检测CD235+、SYTO-64-细胞，计算脱核率。使用血细胞计数仪检测RBC，ELISA法检测2,3-二磷酸甘油（2,3-DPG）、化学发光法检测ATP，观察细胞形态。结果最佳脱核条件为培养第15天添加PI3K浓度为100ng/mL、HDAC2浓度为150ng/mL和松弛素B浓度为75ng/μL。培养至第21天，优选组红细胞脱核率为（74.30±5.59）%，对照组为（28.30±14.10）%，优选组高于对照组（t=9.099，P=0.012）。培养体系获得RBC平均可达2×1010/L，红细胞ATP、2,3-DPG与正常红细胞无差异，红细胞形态与正常红细胞一致。结论以上最佳脱核条件建立的培养体系可促进造血干细胞体外生成红细胞高效脱核。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.5.2023-2107 |
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| 基金项目:浙江省基础公益研究计划项目（LTGY23H080003） |
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