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| 目的采用成簇的规律性间隔的短回文重复序列（CRISPR）/Cas9系统对斑马鱼胱硫醚-β-合成酶b基因（cbsb）进行编辑，并制备稳定的斑马鱼cbsb敲除品系。方法使用ClustalX软件分析斑马鱼cbsb编码蛋白（Cbsb）的保守结构域，利用生物信息学选取向导RNA（gRNA）靶点，体外合成并纯化gRNA和密码子优化的Cas9mRNA，在刚受精的斑马鱼胚胎（1-cell期）中显微注射混合的gRNA和Cas9mRNA，提取受精后3d的斑马鱼幼鱼基因组，通过PCR扩增并测序分析靶点的切割效率，通过基因组扩增和测序筛选并获得cbsb敲除的稳定品系。结果斑马鱼Cbsb与人、小鼠胱硫醚-β-合成酶（CBS）高度同源。在斑马鱼Cbsb保守结构域的编码序列处设计4个靶点，其中4#靶点具有高效的切割效率，利用该靶点制备并筛选获得多个cbsb敲除斑马鱼，选取-3+13bps和-228bps移码突变的两种品系，进一步筛选获得稳定的cbsb敲除品系。结论利用CRISPR/Cas9系统成功制备了两种斑马鱼cbsb敲除的稳定品系，为进一步在斑马鱼活体中研究Cbsb的功能奠定了基础。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.4.2023-2213 |
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| 基金项目:浙江省医药卫生科技计划项目（2022RC293） |
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