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| 目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNAMEG3）调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制。方法采用葡萄糖诱导小鼠肾足细胞（MPC5）构建足细胞损伤模型。将细胞分为高糖组、高糖+短发夹RNA的阴性对照（sh-NC）组、高糖+干扰LncRNAMEG3表达的短发夹RNA（sh-LncRNAMEG3）组、高糖+sh-LncRNAMEG3+3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、高糖+sh-LncRNAMEG3+干扰结节性硬化症复合体1表达的短发夹RNA（sh-TSC1）组和对照组。采用四甲基偶氮唑盐法检测MPC5活性，采用流式细胞术检测MPC5凋亡率，采用实时荧光定量PCR检测LncRNAMEG3相对表达水平，采用Westernblot检测自噬相关蛋白[重组人自噬效应蛋白（Beclin-1）、结节性硬化症复合体1（TSC1）、选择性自噬接头蛋白（p62）和微管相关蛋白轻链3（LC3）]表达，采用荧光原位杂交技术检测LncRNAMEG3的表达定位。结果高糖组MPC5活性低于对照组，高糖+sh-NC组MPC5活性低于高糖+sh-LncRNAMEG3组，高糖+sh-LncRNAMEG3+sh-TSC1组、高糖+sh-LncRNAMEG3+3-MA组MPC5活性低于高糖+sh-LncRNAMEG3组（均P＜0.01)。高糖组MPC5凋亡率高于对照组，高糖+sh-NC组MPC5凋亡率高于高糖+sh-LncRNAMEG3组，高糖+sh-LncRNAMEG3+sh-TSC1组、高糖+sh-LncRNAMEG3+3-MA组MPC5凋亡率高于高糖+sh-LncRNAMEG3组（均P＜0.01)。高糖组MPC5的LncRNAMEG3相对表达水平高于对照组，高糖+sh-NC组MPC5的LncRNAMEG3相对表达水平高于高糖+sh-LncRNAMEG3组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。高糖组LC3、Beclin-1、TSC1蛋白表达低于对照组，p62蛋白表达高于对照组，高糖+sh-LncRNAMEG3组LC3、Beclin-1、TSC1蛋白表达高于高糖+sh-NC组，p62蛋白表达低于高糖+sh-NC组，高糖+sh-LncRNAMEG3+sh-TSC1组TSC1蛋白表达低于高糖+sh-LncRNAMEG3组，高糖+sh-LncRNAMEG3+3-MA组、高糖+sh-LncRNAMEG3+sh-TSC1组的LC3、Beclin-1蛋白表达低于高糖+sh-LncRNAMEG3组，p62蛋白表达高于高糖+sh-LncRNAMEG3组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。高糖+sh-LncRNAMEG3组TSC1蛋白表达高于高糖+sh-NC组，差异有统计学意义（P＜0.01）。LncRNAMEG3在细胞核和细胞质中均可表达。结论LncRNAMEG3可通过靶向TSC1介导MPC5自噬，进而减轻糠尿病肾病足细胞损伤程度。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.16.2023-2629 |
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| 基金项目:杭州市医药卫生科技计划项目（B20220042）；浙江省医学会临床医学科研专项资金项目（2022ZYC-A146）；浙江省中医药科技计划项目（2023ZL612） |
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