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| 目的探究Jumonji结构域蛋白3（JMJD3）通过Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路调控脓毒症诱导的人肾小管上皮细胞HK-2铁死亡的作用机制。方法将HK-2细胞分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+空白对照的小干扰RNA（si-NC）组、LPS+JMJD3的小干扰RNA（si-JMJD3）组、LPS+si-JMJD3+铁死亡激动剂（erastin）组、LPS+si-JMJD3+空白对照的过表达载体（oe-NC）组和LPS+si-JMJD3+TLR4的过表达载体（oe-TLR4）组。对照组细胞正常培养，LPS组细胞用LPS处理，LPS+si-NC组细胞经LPS处理后转染si-NC，LPS+si-JMJD3组细胞经LPS处理后转染si-JMJD3，LPS+si-JMJD3+erastin组细胞经LPS处理并转染si-JMJD3后用erastin处理，LPS+si-JMJD3+oe-NC组细胞经LPS处理并转染si-JMJD3后再转染空载腺病毒，LPS+si-JMJD3+oe-TLR4组细胞经LPS处理并转染si-JMJD3后再转染过表达TLR4的腺病毒。采用蛋白质印迹法检测JMJD3、谷胱甘肽过氧化物酶4（Gpx4）、铁蛋白重链1（FTH-1）、TLR4、NF-κB和磷酸化NF-κB（p-NF-κB）蛋白表达水平，细胞计数试剂盒-8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，比色法检测细胞中Fe2+水平。结果与对照组比较，LPS组JM-JD3蛋白表达水平升高，细胞活性降低，细胞凋亡率和细胞中Fe2+水平均升高（均P＜0.05）。与LPS+si-NC组比较，LPS+si-JM-JD3组JMJD3、Gpx4、TLR4和p-NF-κB蛋白表达水平均降低，FTH-1蛋白表达水平升高，细胞活性升高，细胞凋亡率和细胞中Fe2+水平均降低（均P＜0.05）。与LPS+si-JMJD3组相比，LPS+si-JMJD3+erastin组Gpx4蛋白表达水平升高，FTH-1蛋白表达水平降低，细胞活性降低，细胞凋亡率和细胞中Fe2+水平均升高（均P＜0.05）。与LPS+si-JMJD3+oe-NC组相比，LPS+si-JM-JD3+oe-TLR4组TLR4和p-NF-κB蛋白表达水平均升高，细胞活性降低，细胞凋亡率和细胞中Fe2+水平均升高（均P＜0.05）。结论JMJD3能够通过激活TLR4/NF-κB信号通路，进而促进脓毒症诱导的肾小管上皮细胞的铁死亡。 |
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| 基金项目:国家中医药管理局科技司-浙江省中医药管理局共建科技计划项目（GZY-ZJ-KJ-24070）；浙江省中医药科技计划项目（2022ZA079） |
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