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| 目的探讨富含半胱氨酸蛋白61（CCN1）对慢性肾脏病（CKD）小鼠骨骼肌萎缩的影响及作用机制，为CKD骨骼肌萎缩的治疗寻找新的靶点。方法将24只SPF级雄性小鼠按随机数字表法分为造模组、假手术组、过表达造模组、过表达假手术组，每组6只。造模组与过表达造模组经5/6肾切除术建立CKD小鼠模型，假手术组与过表达假手术组进行假手术。采用腺相关病毒（AAV9）载体传递系统过表达CCN1，采用自身对照，过表达造模组与过表达假手术组分别注射CCN1载体形成载体造模组与载体假手术组，分别注射空AAV9载体形成空载体造模组与空载体假手术组。过表达造模完成4周后测定各组小鼠体质量，采用小鼠代谢笼留取24h尿量，采用颈椎脱臼法处死小鼠，采集小鼠腓肠肌、胫骨前肌、肾脏、血液标本。计算腓肠肌体质量比值与胫骨前肌体质量比值；马松染色观察肾脏病理改变；按试剂盒说明操作测定血肌酐、血尿素氮水平；层粘连蛋白免疫荧光染色观察胫骨前肌肌纤维横截面积及分布；反转录聚合酶链反应检测腓肠肌CCN1转录水平表达；采用蛋白质印迹法检测小鼠腓肠肌组织CCN1、肿瘤蛋白53（p53）、多肿瘤抑制因子1（p16）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21（p21）、视网膜母细胞瘤（RB）蛋白表达情况。结果与假手术组比较，造模组腓肠肌体质量比值下降，空载体造模组腓肠肌体质量比值、胫骨前肌体质量比值上升，载体造模组腓肠肌体质量比值上升、胫骨前肌体质量比值下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；与空载体造模组比较，载体造模组腓肠肌体质量比值和胫骨前肌体质量比值均明显降低（均P＜0.05）；与空载体假手术组比较，载体假手术组胫骨前肌体质量比值明显降低（P＜0.05）。与假手术组比较，造模组、空载体假手术组、空载体造模组、载体造模组胫骨前肌肌纤维平均横截面积均明显缩小（均P＜0.05）。与假手术组比较，造模组小鼠肾脏马松染色可见肾间质纤维化改变；与造模组比较，过表达造模组可见肾小管扩张，部分肾小管上皮细胞脱落，甚至形成裸基底膜，部分可见间质纤维化。与假手术组比较，造模组和过表达造模组小鼠24h尿量、血肌酐、尿素氮水平均明显升高（均P＜0.05）；与过表达假手术组比较，过表达造模组24h尿量、血肌酐、尿素氮水平均明显升高（均P＜0.05）。与假手术组比较，造模组、载体假手术组、空载体造模组、载体造模组腓肠肌组织CCN1mRNA、CCN1、p53、p16、p21、RB蛋白表达水平均升高，空载体假手术组p53、p16、RB蛋白表达水平均升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；与空载体造模组比较，载体造模组腓肠肌组织CCN1mRNA、CCN1蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）。结论CCN1可能通过p53途径促进小鼠骨骼肌衰老，并导致小鼠骨骼肌萎缩的发生。 |
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| 基金项目:国家自然科学基金项目（81671403、30871179）；浙江省卫生健康委员会面上项目（2021KY203）；温州市基础性科研项目（Y20220032） |
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