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| 目的探讨下调核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体表达对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及其介导线粒体自噬的作用机制。方法采用随机数字表法将18只BALB/c小鼠分为假手术组（sham组）、脓毒症模型组[盲肠结扎穿孔术（CLP）组]和MCC950（NLRP3特异性抑制剂）干预组（CLP+MCC950组），每组6只。采用CLP制作脓毒症模型。术前2h，CLP+MCC950组小鼠腹腔注射50mg/kgMCC950（用0.9%氯化钠溶液稀释至0.5mL），sham组和CLP组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。CLP术后24h收集小鼠肺泡灌洗液及肺脏组织标本。将另外45只小鼠采用随机数字表法分为sham组、CLP组和CLP+MCC950组，记录小鼠7d生存率。采用HE染色法观察肺损伤严重程度，并测量湿重/干重（W/D）比值。采用ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10蛋白水平；Westernblot法检测肺组织炎症相关蛋白[NLRP3、NF-κBp65、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65]、凋亡相关蛋白[裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved-Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）]和自噬相关蛋白[磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导的激酶1（PINK1）、E3泛素连接酶（Par-kin）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、选择性自噬接头蛋白p62]表达水平。结果sham组小鼠7d生存率为100.0%。CLP组小鼠7d累计死亡11只，7d生存率为26.7%（4/15）。与sham组比较，CLP组小鼠7d生存率明显降低（P＜0.01）；肺组织W/D比值升高（P＜0.05）；肺组织肺泡结构破坏严重，肺泡壁增厚，伴有明显的肺水肿和炎性细胞浸润；肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10蛋白水平升高（均P＜0.05）；肺组织中NLRP3、p-NF-κBp65、Cleaved-Caspase-3、Bax、PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平升高，Bcl-2和p62蛋白表达水平降低（均P＜0.05）。CLP+MCC950组小鼠7d累计死亡8只，7d生存率为46.7%（7/15）。CLP组和CLP+MCC950组小鼠7d生存率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与CLP组比较，CLP+MCC950组小鼠肺组织W/D比值降低（P＜0.05）；肺组织肺泡结构破坏稍减少，肺泡壁增厚减轻，肺水肿和炎性细胞浸润亦减少；肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平降低，IL-10蛋白水平进一步升高（均P＜0.05）；肺组织中NLRP3、p-NF-κBp65、Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低，Bcl-2蛋白表达水平升高（均P＜0.05）；PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平进一步升高，p62蛋白表达水平进一步下降（均P＜0.05）。结论NLRP3炎症小体的下调可改善脓毒症小鼠的急性肺损伤，其作用可能依赖于调节PINK1/Parkin介导的线粒体自噬通路。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.22.2024-1293 |
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| 基金项目:杭州市临安区农业与社会发展立项项目（2021Y03） |
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