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| 目的基于序列特异性引物PCR（PCR-SSP）技术建立一种用于检测临床标本红细胞RhCE血型基因型的快速定型方法。方法将2023年9至12月宁波大学附属第一医院收检的152例乙二胺四乙酸抗凝血样分别采用试管法、间接抗人球法和微柱凝胶卡法检测RhD血型和RhCE血型。采用硅基质柱法提取样本DNA。采用Sanger测序法选择RhCE基因标准品序列。采用PCR-SSP法确定检测RhC和Rhc、RhE和Rhe两对等位基因的4对序列特异性引物。采用TA克隆技术得到重组质粒并评估序列特异性引物的灵敏度和抗干扰性能。采用PCR-SSP法检测样本，并与血清学结果进行一致性评价。结果用表型分别为CCee、CcEe、ccEE的3个标本成功确定不同RhCE基因型的标准品序列。4对序列特异性引物能有效区分RhC和Rhc、RhE和Rhe两对等位基因。序列特异性引物在对应等位基因1:128干扰下仍能检测出且灵敏度为104~105拷贝数/μL。临床样本RhE、Rhe和Rhc基因型检测结果与表型一致性为100.00%，但RhC基因型与表型一致性只有92.76%，其中RhD阳性背景人群中的一致率为98.39%，RhD阴性背景人群中一致率为88.89%。结论PCR-SSP技术在红细胞RhCE血型基因型快速鉴定方面具有可行性，检测RhE、Rhe和Rhc基因型与表型具有较高的一致性，对RhC基因型的检测，需区分不同RhD血型背景，建议使用两种及以上的方法进行综合判断。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.19.2024-706 |
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| 基金项目:中国人口福利基金会医学创新课题（SLB-6-20230912-351）；宁波市科技局重点项目（2023J020）；浙江省医药卫生科技计划项目（2024KY1495） |
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