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目的分析miR-145-5p在牙龈卟啉单胞菌(Pg)诱导的体外牙周炎模型中通过转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路对巨噬细胞极化的影响。方法使用Pg-脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞Raw264.7诱导构建体外牙周炎模型,分为NC组(空白对照)、Pg-LPS刺激组、Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组(miR-145-5p过表达)。在光镜下观察3组细胞形态。采用qRT-PCR法检测3组细胞精氨酸酶-1(Arg-1)、一氧化氮合酶(iNOS)、IL-6、IL-10、TGF-β1、Smad3mRNA及miR-145-5p表达水平。采用Westernblot法检测3组细胞Arg-1、iNOS、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。采用流式细胞术检测3组细胞亚群比例。结果光镜下可见,Pg-LPS刺激组多角状的M1型巨噬细胞比例增高,Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组多角状的M1型巨噬细胞比例低于Pg-LPS组。Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组miR-145-5p表达水平明显高于NC组和Pg-LPS刺激组(均P<0.05)。Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组Arg-1、IL-6mRNA表达水平高于NC组和Pg-LPS刺激组(均P<0.05),iNOS、IL-10、Smad3、TGF-β1表达水平低于NC组和Pg-LPS刺激组(均P<0.05)。Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组Arg-1蛋白表达水平高于Pg-LPS刺激组,iNOS、TGF-β1、Smad3蛋白表达水平均低于NC组和Pg-LPS刺激组(均P<0.05)。Pg-LPS刺激+miR-145-5pmimics转染组细胞M1型比例低于NC组(P<0.05),M2型比例高于NC组(P<0.05)。结论miR-145-5p可能通过抑制TGF-β1/Smads通路中的Smad3蛋白表达,抑制巨噬细胞向M1型极化,促进向M2型极化,减轻炎症反应,或可作为牙周炎治疗的潜在靶点。 |
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基金项目:杭州市科技计划引导项目(20201231Y147) |
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