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| 目的探讨大黄素（Emo）调控树突状细胞结节性硬化症复合体1（Tsc1）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）通路对Th1/Th2细胞极化治疗脓毒症的影响。方法将小鼠分对照组、模型组（采用盲肠结扎和穿刺法构建小鼠脓毒症模型）、模型+Emo组；采用脂多糖（LPS）构建树突状细胞（通过小鼠股骨骨髓获取）脓毒症模型，分为对照组、LPS组、LPS+Emo组；采用Transwell构建树突状细胞与CD4+T细胞（通过腹腔灌洗液获取）共培养体系，分为LPS组、LPS+Emo组、LPS+Emo+sh-NC组、LPS+Emo+sh-Tsc1组细胞；采用HE染色观察各组小鼠心、肺、肝组织损伤情况；采用流式细胞术分离CD4+T细胞，以及检测Th1和Th2细胞分化情况；采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α和IL-1β的表达情况以及小鼠脾脏和树突状细胞培养上清液中IL-12和IL-4的表达情况；采用Westernblot法检测各组小鼠脾脏和各组树突状细胞中Tsc1和mTORC1信号通路关键蛋白（S6、pS6）的表达情况。结果小鼠体内模型中，与对照组相比，模型组小鼠心、肝、肺显著损伤，脾脏中TNF-α和IL-1β表达显著升高，Th1/Th2细胞比例显著升高，Tsc1蛋白表达显著降低，S6蛋白磷酸化水平显著增高；与模型组相比，模型+Emo组小鼠心、肝、肺组织损伤部分恢复，脾脏中TNF-α和IL-1β表达显著降低，Th1/Th2细胞比例显著降低，Tsc1蛋白表达显著升高，S6蛋白磷酸化水平显著降低。体外树突状细胞模型中，与LPS组相比，LPS+Emo组细胞培养上清液中Tsc1蛋白表达升高，pS6蛋白表达降低，IL-12和IL-4表达显著降低，Th1/Th2细胞比例显著降低；抑制Tcs1表达后，与LPS+Emo+sh-NC组相比，LPS+Emo+sh-Tsc1组细胞培养上清液中IL-12和IL-4表达显著升高，Tsc1蛋白表达降低，pS6蛋白表达升高，Th1/Th2细胞比例显著升高。结论Emo对脓毒症有明显的治疗作用，其作用机制可能为通过调控树突状细胞中Tsc1/mTORC1通路，影响树突状细胞分泌T细胞极化因子IL-12和IL-4，从而影响Th1/Th2细胞极化以治疗脓毒症。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.20.2024-959 |
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| 基金项目:浙江省卫生健康科技计划项目（2022KY926）；浙江省中医药科技计划项目（2023ZL440） |
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