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目的 探讨经血间充质干细胞外泌体(MenSCs-EXOs)对顺铂(DDP)损伤人卵巢颗粒细胞 KGN 的保护作用及可
能的分子机制。 方法 采用超速离心法分离MenSCs-EXOs,并用透射电子显微镜和蛋白质印迹(Western blot)法鉴定。用不同
浓度 DDP 处理 KGN,采用细胞计数试剂盒 8(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,筛选出最佳 DDP 作用浓度。
KGN再根据处理方式分为3组:对照(Con)组(正常KGN培养基)、DDP组(含最佳DDP作用浓度的培养基)和DDP-EXOs 处理组
(含最佳 DDP 作用浓度和 10 μg/mL MenSCs-EXOs 的培养基),培养 48 h 后采用 CCK-8 法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验检
测激素分泌水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测转化生长因子-β(TGF-β)/母亲DPP同源物(SMAD)信号通路
相关蛋白表达水平。 结果 采用超速离心法可分离获得 MenSCs-EXOs,3 mg/L DDP 可以同时显著抑制 KGN 增殖和诱导 KGN
凋亡(均P<0.05),因此选择该浓度作为最佳DDP作用浓度。与Con组比较,DDP组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,雌二醇(E2)
水平降低,SMAD2、SMAD7和SMAD泛素化调节因子2(SMURF2)蛋白表达水平均升高,SMAD3和SMAD4蛋白表达水平均降低,
差异均有统计学意义(均 P<0.05);与 DDP 组比较,DDP-EXOs 组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,E2水平升高,SMAD2、SMAD7
和 SMURF2 蛋白表达水平均降低,SMAD3 和 SMAD4 蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论 MenSCs-EXOs 可有效促进 DDP 损伤颗粒细胞增殖,并抑制其凋亡,其机制可能是通过激活 TGF-β/SMAD 信号通路来实现良好的保
护效果。 |
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基金项目:金华市科学技术研究计划项目(2023-3-138) |
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