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| 目的探讨胎盘源性外泌体（Exo）miR-122-5p改善妊娠糖尿病（GDM）小鼠脐静脉内皮细胞（MUVECs）功能损伤的机制。方法取妊娠小鼠腹腔注射0.25%链脲佐菌素溶液以诱导GDM模型（GDM组），对照组小鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液，检测两组FPG和胰岛素水平验证模型。采用HE染色观察小鼠胎盘组织形态，qRT-PCR法检测miR-122-5p表达情况，Westernblot法检测核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3（NLRP3）炎症小体相关蛋白[包括NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白、半胱氨酸蛋白酶-1]表达。采用差速离心法获得胎盘源性Exo，并采用透射电子显微镜和纳米颗粒追踪分子对Exo表征进行鉴定；与MUVECs共培养后，采用免疫荧光法观察MUVECs对Exo的摄取。采用噻唑蓝法、流式细胞术、Transwell实验和血管形成实验检测MUVECs细胞活性、凋亡能力、迁移能力和成管能力。结果GDM组小鼠FPG水平明显高于对照组（P＜0.001），胰岛素水平低于对照组（P＜0.001），提示模型构建成功。与对照组相比，GDM组小鼠胎盘组织出现明显损伤，miR-122-5p表达水平降低，NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。MU-VECs能对胎盘源性Exo进行摄取，且GDM小鼠胎盘Exo上调了MUVECs中miR-122-5p表达水平（P＜0.001）。GDM小鼠胎盘Exo共培养的MUVECs较对照小鼠胎盘Exo共培养的MUVECs细胞活性增强，凋亡能力减弱，迁移能力和成管能力均增强，且NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。过表达miR-122-5p的MUVECs细胞活性增强，凋亡能力减弱，迁移能力和成管能力均增强，NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；抑制miR-122-5p表达后，MUVECs细胞活性减弱，凋亡能力增强，迁移能力和成管能力均减弱，NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平均明显升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论胎盘源性Exo的miR-122-5p对GDMMUVECs起到保护作用，且可能通过调控NLRP3炎症小体的活化来改善MUVECs的损伤。 |
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| DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2024.46.21.2024-177 |
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| 基金项目:浙江省医药卫生科技计划项目（2021KY854） |
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